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德國MB熒光定量PCR法(qPCR)檢測試劑盒介紹

更新時(shí)間:2023-05-05  |  點(diǎn)擊率:533

熒光定量PCR法(qPCR):是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上,將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標(biāo)記,使PCR擴(kuò)增后的產(chǎn)物帶有熒光,利用熒光信號的變化和配套軟件,進(jìn)行DNA擴(kuò)增反應(yīng)的實(shí)時(shí)監(jiān)測,簡稱qPCR。

優(yōu)點(diǎn):①靈敏度高、特異性強(qiáng)。

②時(shí)間短,2-3小時(shí)出結(jié)果。

③檢測結(jié)果可定量。

④操作簡便。

缺點(diǎn):①對于已做支原體滅活處理的樣品,由于支原體DNA仍舊存在其中,PCR結(jié)果會出現(xiàn)假陽性。(可用培養(yǎng)法做補(bǔ)充驗(yàn)證)

②不同廠家生產(chǎn)的試劑盒質(zhì)量差異巨大(由于引物及內(nèi)在設(shè)計(jì)不同),需謹(jǐn)慎選擇,盡量在專業(yè)人員推薦指導(dǎo)下使用。

支原體熒光定量PCR檢測試劑盒(qPCR經(jīng)典法)(符合歐洲藥典)-熒光定量PCR檢測-北京締一生物科技有限公司


  • 特點(diǎn)

  • 1. 內(nèi)控對照為獨(dú)立包裝,遵循歐洲藥典和日本藥典操作流程。

  • 2. 高特異性,一次檢測即可涵蓋所有常見易感染細(xì)胞的支原體物種(包括歐洲藥典規(guī)定的9種支原體)。與細(xì)菌和真核DNA無交叉反應(yīng)。

  • 3. 高靈敏度,檢測限可達(dá)到≤10CFU/ml。

  • 4. 有相應(yīng)配套的支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA,便于特異性驗(yàn)證。

  • 5.有相應(yīng)配套的支原體定量標(biāo)準(zhǔn)品,便于后定量檢測。 操作步驟

  • 第1步:樣本處理 a.細(xì)胞培養(yǎng)上清

  • b. 生物藥或需遵循藥典的樣本 說明:①樣品基質(zhì)可能會影響檢測的靈敏度。收集和篩選更高的樣品量可提高測定靈敏度。 ②細(xì)胞培養(yǎng)物樣本含豐富的DNA酶,在低溫下也能降解支原DNA,影響檢測靈敏度。 建議:樣本做DNA抽提處理,實(shí)現(xiàn)較高靈敏度。 推薦:德國MB公司生產(chǎn)的支原體DNA提取試劑盒 Venor® Gem Sample Preparation Kit 該DNA抽提試劑盒已經(jīng)過廣泛驗(yàn)證。 第2步:試劑制備 a. 凍干粉溶解

  • b. 反應(yīng)體系制備 b1) 樣品為細(xì)胞上清篩查——反應(yīng)體系制備

  • b2) 樣品為生物藥——反應(yīng)體系制備

  • 第3步:啟動熒光定量PCR儀

  • 第4步:結(jié)果判別 FAM通道:檢測支原體熒光信號。HEX通道:檢測內(nèi)控對照熒光信號。 支原體DNA和內(nèi)控DNA存在信號的競爭性抑制。 支原體DNA越多,F(xiàn)AM通道信號越高,檢測內(nèi)控對照的HEX通道信號越低。 定量需基于Ct值和DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線。 Ct<40為陽性結(jié)果。Ct≥40為陰性結(jié)果。



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