實(shí)驗(yàn)室中，如何快速檢測RNA病毒？德國MB生產(chǎn)的ConviFlex™RT-Taq Mix是一種凍干通用RT-PCR主混合物，專為RNA分子的定性檢測和分析而設(shè)計(jì)，特別適用于RNA病毒的檢測。

ConviFlex™RT-Taq Mix是一種即用型一步RT-PCR試劑盒，包含MuLV逆轉(zhuǎn)錄酶，熱啟動Taq聚合酶和dNTPs在凍干主混合物中。用隨附的2倍補(bǔ)液緩沖液重組后，ConviFlex™RT-Taq Mix包含RT-PCR擴(kuò)增所需的所有核心成分。

除了RNA模板和引物。這可以大大減少設(shè)置RT-PCR反應(yīng)所需的移液步驟，動手時(shí)間和交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)。

ConviFlex™RT-PCR Mix中包含的Taq聚合酶具有熱啟動功能。即使在環(huán)境溫度下，其活性也會在PCR過程中被抗taq DNA聚合酶抗體阻斷。當(dāng)溫度升高到70℃以上時(shí)，這種抑制作用在變性過程中被逆轉(zhuǎn)，導(dǎo)致Taq聚合酶被激活。因此，非特異性PCR產(chǎn)物和引物二聚體的形成被強(qiáng)烈抑制，導(dǎo)致PCR反應(yīng)具有更高的特異性、更高的靈敏度和更高的產(chǎn)量。混合物中包含的逆轉(zhuǎn)錄酶是一種轉(zhuǎn)基因的小鼠白血病病毒(M-MuLV)。ConviFlex™RT-PCR Mix可以很容易地適應(yīng)大多數(shù)RT-PCR協(xié)議，程序和循環(huán)器類型。因此，本文檔中的RT-PCR設(shè)置和協(xié)議僅是RT-PCR系統(tǒng)的建議。最佳體積、濃度、溫度和孵育時(shí)間可能因您的具體應(yīng)用而有很大差異，應(yīng)根據(jù)您自己的分析要求進(jìn)行調(diào)整。

ConviFlex™RT-Taq Mix可用于真核、原核、病毒RNA和體外轉(zhuǎn)錄RNA的反轉(zhuǎn)錄和PCR擴(kuò)增。使用市售的RNA提取試劑盒(參見ExtractNow™RNA Mini kit Cat)，可以從組織、拭子和活組織、哺乳動物細(xì)胞和細(xì)菌等不同的起始材料中提取RNA。No. 603-1050或ExtractNow™病毒RNA Kit Cat編號611-1010/-1050/-1250)或建立良好的提取方法。RNA制備必須不含RT-PCR抑制劑，如有機(jī)溶劑等。提取的RNA的降解極大地限制了RT-PCR反應(yīng)的性能。盡量減少RNA樣品或RNA酶污染的凍融循環(huán)次數(shù)有助于防止RNA降解。DNA污染也會降低RT-PCR的產(chǎn)率。