實時聚合酶鏈式反應(yīng)（Real-time PCR，RT-PCR）是一種高效、靈敏且廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的技術(shù)。它結(jié)合了傳統(tǒng)PCR技術(shù)和熒光探針的使用，使我們能夠?qū)崟r監(jiān)測PCR反應(yīng)過程中目標DNA或RNA的擴增量，從而可以準確快速地定量分析樣本中的特定分子。

RT-PCR的工作原理非常簡單，它包括三個主要步驟：逆轉(zhuǎn)錄、PCR擴增和熒光檢測。

首先，通過逆轉(zhuǎn)錄酶（Reverse Transcriptase）的作用，將RNA逆轉(zhuǎn)錄成其對應(yīng)的cDNA（復(fù)制的DNA）。這一步允許我們將RNA樣本轉(zhuǎn)化為DNA，從而方便后續(xù)的PCR擴增分析。

接下來，將逆轉(zhuǎn)錄后得到的cDNA用作PCR的模板。通過加入特定的引物（primers）和熒光探針（例如TaqMan探針或SYBR Green探針），我們可以選擇性地擴增和檢測感興趣的目標序列。

在PCR反應(yīng)過程中，熒光探針與PCR產(chǎn)物結(jié)合，并釋放出熒光信號，這個信號的強度與目標序列的起始數(shù)量成正比。利用實時PCR儀器，我們可以實時監(jiān)測這些熒光信號的累積，從而獲得PCR反應(yīng)的實時擴增曲線。通過分析擴增曲線，我們可以確定樣本中目標分子的起始數(shù)量，并進一步比較不同樣本之間的相對表達水平。

RT-PCR在許多研究領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用：

基因表達分析：RT-PCR可用于研究基因在不同組織、細胞類型或治療條件下的表達水平。這有助于了解基因在生理和病理過程中的功能和調(diào)控機制。

病毒檢測：RT-PCR是許多病毒檢測的主要方法，包括感病毒、HIV等。它可以快速、準確地檢測病毒的存在，并用于臨床診斷和流行病學(xué)研究。

微生物學(xué)研究：RT-PCR可用于檢測和定量微生物的存在，例如細菌、真菌和寄生蟲等。這對于了解微生物的種類和數(shù)量在感染和疾病中的作用至關(guān)重要。

癌癥診斷：RT-PCR在癌癥診斷中也有廣泛應(yīng)用。通過檢測腫瘤標志物的表達水平，可以幫助早期發(fā)現(xiàn)癌癥并監(jiān)測治療效果。

總結(jié)起來，實時聚合酶鏈式反應(yīng)（RT-PCR）是一種高效、靈敏且廣泛應(yīng)用的分子生物學(xué)技術(shù)。它在基因表達分析、病毒檢測、微生物學(xué)研究和癌癥診斷等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。隨著技術(shù)的不斷發(fā)展，RT-PCR在醫(yī)學(xué)和生物學(xué)研究中將繼續(xù)扮演關(guān)鍵的角色，并為科學(xué)家們提供強大的工具來深入研究和理解生命的奧秘。

在進行分子實驗前，需要對實驗環(huán)境進行清潔。在PCR實驗室中，DNA污染很難清除。即使只有一個污染的DNA分子被檢測到，也會使整個PCR檢測過程出現(xiàn)誤差。為確保PCR試驗數(shù)據(jù)準確，預(yù)防DNA或RNA交叉污染，PCR實驗室大多會常備DNA/RNA污染清除劑。

祛除DNA污染噴霧劑（實驗環(huán)境用）——PCR-Clean，可有效地降解大多數(shù)表面上（輕質(zhì)金屬或有色金屬除外）的擴增子，質(zhì)粒或基因組DNA和RNA。該產(chǎn)品還能有效地去除DNA酶和RNA酶。